體外重折疊核糖核酸酶A及其熒光結構表征

核糖核酸酶A(RNase A)作為蛋白質體外重折疊研究的模型蛋白,考察了稀釋復性過程中脲濃度、稀釋倍數(shù)、氧化還原環(huán)境(GSH濃度和GSH/GSSG比例)、pH值、溫度以及聚集抑制劑的添加對該酶活性回收率的影響.在變性蛋白濃度為100 μg·mL-1,復性液含有2 mol·L-1脲,GSH濃度2 mmol·L-1,GSH/GSSG比為4:1,pH8.0,并添加終濃0.1%的PEG,轉速為150 r·min-1,溫度37℃的條件下復性,RNase A的活力回收率可達70%以上.利用熒光分析法對RNase A復性過程的結構變化進行了表征,在此基礎上對RNase A體外重折疊過程蛋白質分子的構象變化以及活性中心的形成過程進行了闡述.

作 者： 譚培生 羅曼 盛清 關怡新 姚善涇 TAN Pei-sheng LUO Man SHENG Qing GUAN Yi-xin YAO Shan-jing   作者單位： 譚培生,羅曼,關怡新,姚善涇,TAN Pei-sheng,LUO Man,GUAN Yi-xin,YAO Shan-jing(浙江大學,化學工程與生物工程學系,浙江,杭州,310027)

盛清,SHENG Qing(浙江理工大學,生命科學學院,浙江,杭州,310018) 

刊 名： 浙江大學學報（農(nóng)業(yè)與生命科學版）  ISTIC PKU 英文刊名： JOURNAL OF ZHEJIANG UNIVERSITY(AGRICULTURE & LIFE SCIENCES)  年，卷(期)： 2006 32(5)  分類號： Q518.4  關鍵詞： 核糖核酸酶A   稀釋復性   熒光分析法   分子結構  

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